甲烷(CH4)孝顺了约25%的温室效应[1]。尽管大气中CH4的含量比CO2低许多一路向西电影，但其温室效应是CO2的28倍，何况在大气中的寿命只须12年，比CO2 (300–1 000年)短好多，因此，适度CH4排放被以为是适度众人变暖最快和最灵验的措施之一[2]。自然湿地固然仅占陆大地积的5%–8%，但储藏了陆地20%–30%的碳，是甲烷的主要排放源之一[3]。跟着众人变暖，陆地碳有可能成为热切的碳源。湿地的甲烷年排放量意料为100−200 Tg，终点于众人排放总量的20%[4]。

位于黑龙江省西部乌裕尔河下贱的扎龙国度级当然保护区的扎龙湿地是典型的内陆盐碱湿地，面积21万hm2，亦然全国上最大的芦苇湿地[5]。扎龙盐碱湿地芦苇根际土的pH值为8.34–8.58[6]。频频以为中性和碱性湿地的CH4排放通量显耀高于酸性泥土的湿地，如泥土pH值为7.7的碱性湿地的CH4平均排放量为14.81 mg/(m2·h)[7]，而酸性泥炭泽的CH4平均排放量仅为0.06 mg/(m2·h)[8]。Liu等[9]测定扎龙湿地的CH4排放量时发现，不收割芦苇的湿地甲烷排放量是(7.89±1.35) mg/(m2·h)，而收割芦苇的湿地甲烷排放只须(2.35±0.55) mg/(m2·h)。仝川等[10]发现芦苇孕育季比非孕育季的甲烷量高，在芦苇孕育期的8–9月，湿地的平均CH4排放量为(10.72±5.10) mg/(m2·h)，干预冻结期后显耀裁减至(3.94±2.25) mg/(m2·h) (P < 0.05)。Liu等[11]发咫尺名义覆水溶化的经过中，扎龙湿地平均的CH4排放量降至(1.96±2.50) mg/(m2·h)。这些气象诠释孕育中的芦苇与湿地的甲烷排放接头，但内在原因咫尺尚未可知。

甲烷古菌是咫尺已知的独一产生无数甲烷的生物，它们是严格的厌氧微生物，在无氧的湿地中无数存在。咫尺已知有6条甲烷古菌产甲烷路子：(1) 由氢养分型产甲烷菌以H2复原CO2产甲烷的路子[12]；(2) 乙酸养分型产甲烷古菌进行的乙酸裂解产甲烷路子[13]；(3) 由甲基养分型产甲烷古菌将甲醇、甲胺或甲基硫等复原成甲烷的甲基产甲烷路子[14]；(4) H2复原甲基物金钱甲烷路子[15]；(5) 苯甲酸代谢产甲烷路子[16]；(6) 长链烷烃代谢产甲烷路子[17]。Achtnich等[18]和Conrad[19]推敲发现低温湿地和水稻田中乙酸产甲烷是上风路子；H2复原CO2产甲烷路子在中高讲理酸性泥炭地中占主导，如热带和温带淡水千里积物[20-21]；而甲基产甲烷路子主要存在海洋中，在淡水环境中稀有[22]。Liu等[23]对青藏高原数个低温盐碱湖千里积物的高通量测序清爽，乙酸养分型的甲烷鬃菌和甲基养分型的甲烷叶菌占上风。Sorokin等[24]对西伯利亚西南部地区盐碱湖产甲烷菌群的走访发现，盐浓度影响产甲烷古菌的分散，当盐浓度低于3 mol/L时，乙酸型产甲烷菌甲烷鬃菌属(Methanosaeta)占上风；而盐浓度高于3 mol/L时，甲基产甲烷古菌占上风，主要由甲烷叶菌属(Methanolobus)构成。任秘坊等[25]前期走访发现植被是影响青藏高原盐碱湖甲烷排放的主要身分。三甲胺产甲烷是海湾千里积物中的上风产甲烷路子，厌氧细菌可复原抗高渗物资甜菜碱或胆碱产生三甲胺，再被甲烷古菌复原为甲烷[26]。甜菜碱是一种相似相容物资，在细胞中积蓄有助于莳植植物在干旱和盐渍环境中的孕育[27]。Hanson等[28]的职责标明，盐芦叶中脯氨酸和甜菜碱的含量较高。扎龙湿地芦苇分散庸碌，甜菜碱代谢产甲烷是否是扎龙湿地的上风产甲烷路子有待推敲。

本推敲以扎龙盐碱湿地的水生芦苇根际土为推敲对象，通过16S rRNA基因各类性分析、不同底物产甲烷速度分析、RT-qPCR定量等才智，探究扎龙盐碱湿地的上风产甲烷菌及上风产甲烷路子。

1 材料与才智 1.1 材料

1.1.1 样品

推敲所用芦苇根际泥土样品蚁合于我国东北扎龙湿地当然保护区内(N46°52′−47°32′， E123°47′−124°37′)，该区的年平均气温3.5 ℃。采样时候为2021年6月9日，采样地的平均水位为19.3 cm，泥土pH 8.2−8.6，采样时空气和泥土平均温度辞别为25.3 ℃和17.5 ℃。使用内径38 mm的土钻在每个样方蚁合原状泥土(深度0–20 cm)，将5个重迭样品去辞退义的芦苇根叶后等量搀杂，装入无菌自命袋中，4 ℃保存运回履行室，收藏于–80 ℃备用。

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1.1.2 产甲烷培养基

辞别以终浓度为20 mmol/L的产甲烷底物甲醇(methanol)、三甲胺(trimethylamine， TMA)、甜菜碱(glycine betaine， GBT)、乙酸(acetate)和1.01×105 Pa H2/CO2 (H2: CO2体积比为80:20)添加到产甲烷基础培养基中，产甲烷基础培养基参考Zhang等[29]配制，并使用NaCl和NaOH调至与原位环境交流的盐度和pH，抽换气去除氧气后1.01×105 Pa灭菌20 min，备用。

1.1.3 主要试剂和仪器

Fast DNA SPIN Kit for Soil，MP Biomedicals公司；琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒，好意思基生物科技公司；Ex Taq PCR体系、pMD19-T Vector，TaKaRa公司；SYBR® qPCR Mix，TOYOBO公司；2.0 mL样品瓶套装，Agilent公司。PCR及RT-qPCR所用引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，成例试剂主要购于中国国药集团和上海生物工程技巧有限公司。

厌氧操作箱和NanoDrop ND-1000，Thermo Fisher公司；隔水式恒温培养箱，上海一恒科技有限公司；气相色谱，Shimadzu公司；气密性采样针，上海佳本分析仪器厂；多功能样品均质器，Bertin公司；PCR扩增仪，杭州朗基科学仪器公司；电泳仪，Bio-Rad公司；及时荧光定量PCR仪，Eppendorf公司。

1.2 芦苇根际土开释甲烷测定

1.2.1 不同底物土样富集物的产甲烷速度测定

在厌氧手套箱中称取0–20 cm深扎龙湿地芦苇根际泥土样品各1 g，加入到5 mL已辞别添加终浓度为20 mmol/L的甲醇、三甲胺、甜菜碱、乙酸和H2/CO2 (1.01×105 Pa， H2: CO2体积比为80:20)底物的厌氧产甲烷培养基中，每种培养物设4个平行，辞别于18 ℃和30 ℃培养，使用50 μL进样针准确量取40 μL顶空气体，用气相色谱仪测定甲烷浓度，并在甲烷浓度增多的线性领域内筹画最大产甲烷速度。

1.2.2 气相色谱仪GC-14B测定甲烷

采取配备C18极性填充柱和氢焰离子检测器(flame ionization detector， FID)的气相色谱仪测定甲烷。检测要求为：柱温50 ℃，进样口温度80 ℃，检测器温度130 ℃。

1.3 DNA的提真金不怕火

称取0.5 g芦苇根际土泥土样品，按照Fast DNA SPIN Kit for Soil诠释书提真金不怕火泥土样品基因组DNA。用NanoDrop ND-1000和1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度和纯度，保存于−20 ℃待用。

1.4 PCR扩增及RT-qPCR定量分析

1.4.1 PCR扩增

辞别采取古菌的16S rRNA基因引物Arc-F/Arc-R及细菌的16S rRNA基因引物Bac-27F/Bac-1492R (表 1)扩增古菌和细菌的16S rRNA基因。用表 1列出的甲烷八叠球菌科(Methanosarcinaceae)特异16S rRNA基因引物[25]和甲烷马赛球菌科(Methanomassiliicoccaceae)特异的mtaB基因引物扩增它们的16S rRNA基因和mtaB基因。

PCR响应体系(25 μL)：10×Ex Taq buffer 2.5 μL，dNTP Mixture (2.5 μmol/L) 1 μL，Ex Taq (5 U/μL) 0.25 μL，Primer F (10 μmol/L) 1 μL，Primer R (10 μmol/L) 1 μL，模板(20 ng/μL) 1 μL，ddH2O补足25 μL。PCR响应要求：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，引物Tm退火30 s，72 ℃ 30 s，30个轮回；72 ℃ 10 min。PCR扩增后使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒按照诠释书回收观念条带。

1.4.2 T-载体结合及16S rRNA基因拷贝数的挨次弧线绘画

将胶回收的观念条带纯化回收，回收后观念片断结合到pMD19-T载体并改造大肠杆菌DH5α感受态细胞，抽提阳性单克隆的质粒并线性化动作模板，稀释模板为10−1–10−8，绘画RT-qPCR挨次弧线。

1.4.3 RT-qPCR定量分析

采取表 1列出的甲烷八叠球菌科(Methanosarcinaceae)特异16S rRNA基因引物和甲烷马赛球菌科(Methanomassiliicoccaceae)特异的mtaB基因引物，RT-qPCR定量分析它们的16S rRNA基因和mtaB基因拷贝数。RT-qPCR响应体系(25 μL)：1×SYBR qPCR Mix 12.5 μL，50×ROX 0.5 μL，Primer F (10 μmol/L) 0.5 μL，Primer R (10 μmol/L) 0.5 μL，模板(20 ng/μL) 5 μL，ddH2O补足6 μL。RT-qPCR响应要求：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s，引物Tm退火30 s，72 ℃ 30 s，30个轮回。

1.5 细菌和古菌16S rRNA基因测序

提真金不怕火样品基因组DNA，查考浓度和纯度确保相宜履行要求。PCR扩增样品基因组DNA中细菌16S rRNA基因的V3−V4区和古菌16S rRNA基因的V4−V5区，细菌的引物为Bac-341F/Bac-806R，古菌的引物为Arch-519F/ Arch-915R (表 1)。PCR响应体系(20 μL)：5×FastPfu buffer 4 μL，dNTPs (2.5 mmol/L) 2 μL，上、下贱引物(5 μmol/L)各0.8 μL，FastPfu Polymerase (2.5 U/μL) 0.4 μL，模板DNA (10 ng/μL) 1 μL，ddH2O补足20 μL。PCR响应要求：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s；引物Tm退火30 s，72 ℃ 45 s，30个轮回；72 ℃ 10 min。PCR扩增、高通量测序均由上海凌恩生物科技有限公司在Illumina平台进行PE250形式建库测序完成。

1.6 统计分析

使用Excel进行数据的统计分析，使用GraphPad Prism 8.0软件进行图片绘画。

2 效用与分析 2.1 扎龙湿地原位泥土中的上风产甲烷古菌和细菌构成

对扎龙湿地芦苇根际深0–20 cm的泥土进行16S rRNA基因扩增子测序和OTU聚类分析，共检测到3 786个古菌的OTU，已知分类地位的古菌科占测定总古菌的81.70%。图 1为不同产甲烷古菌科的品貌堆积图，其中氢养分型的甲烷杆菌科(Methanobacteriaceae， 32.8%)品貌最高，其次是厌氧氧化甲烷的噬甲烷菌科(Methanoperedenaceae， 31.52%)、氢养分型的Rice Cluster II (11.55%)、乙酸型的甲烷鬃菌科(Methanosaetaceae， 10.14%)、甲基型的甲烷八叠球菌科(Methanosarcinaceae， 5.88%)及H2复原甲基物金钱甲烷的甲烷马赛球菌科(Methanomassiliicoccaceae， 3.64%) (图 1A)。共检测到产甲烷古菌属25个，相对品貌最高的是氢养分型的甲烷杆菌属(Methanobacterium， 36.42%)，其次为厌氧氧化甲烷的噬甲烷菌属(Candidatus Methanoperedens， 35.06%)、乙酸型的甲烷鬃菌属(Methanosaeta， 11.29%)、甲基型的甲烷八叠球菌属(Methanosarcina， 6.53%)及H2复原甲基型的甲烷马赛球菌属(Methanomassiliicoccus， 4.05%) (图 1A)。

16S rRNA基因各类性分析共检测到6 523个细菌的OTU，已知分类地位的细菌门占检测到的芦苇根际土总细菌的64.31%。上风细菌是绿弯菌门(Chloroflexi， 21.55%)，其次为变形杆菌门(Proteobacteria， 16.88%)、放线菌门(Actinobacteria， 13.37%)、酸杆菌门(Acidobacteria， 10.00%)、拟杆菌门(Bacteroidota， 7.42%)、脱硫杆菌门(Desulfobacterota， 7.77%)和厚壁菌门(Firmicutes， 5.18%) (图 1B)。已知高盐环境中的芦苇细胞积蓄甜菜碱和脯氨酸抗高渗威胁[27-28]，而厚壁菌门中的一些细菌可复原甜菜碱为三甲胺，后者可被甲基型的甲烷古菌改造为甲烷[30]。因此咱们进一步分析厚壁菌门的细菌类群，效用发现具有复原甜菜碱产三甲胺后劲的细菌包括梭菌科(Clostridiaceae， 46.19%)、真杆菌科(Eubacteriaceae， 3.12%)和鼠胞菌科(Sporomusaceae， 1.36%) (图 1B)。

总而言之一路向西电影，扎龙湿地芦苇根际土的上风产甲烷古菌为氢养分型的甲烷杆菌、乙酸型的甲烷鬃菌及乙酸/甲基型的甲烷八叠球菌，并含有与复原甜菜碱产三甲胺能力的细菌相似性较高的菌群，如厚壁菌门内的梭菌科、真杆菌科和鼠胞菌科，它们具有复原甜菜碱产生三甲胺的后劲，后者可被甲基型产甲烷古菌改造为甲烷。

2.2 扎龙湿地芦苇根际土中甜菜碱和三甲胺产甲烷最活跃

为进一步细目扎龙湿地芦苇根际土中活跃的产甲烷路子，咱们在芦苇根际泥土样品等辞别加入已知的产甲烷底物甲醇、三甲胺、甜菜碱、乙酸和H2/CO2，并在模拟原位环境pH 8.0于18 ℃和30 ℃培养4周；每2天测定富集物的产甲烷量，筹画扎龙湿地泥土不同底物的产甲烷速度。效用清爽，甜菜碱和三甲胺的泥土富集物产甲烷速度最高，而H2/CO2富集物的产甲烷速度与无底物添加泥土的产甲烷速度交流(图 2)。这诠释甜菜碱和三甲胺产甲烷是扎龙湿地芦苇根际土中主要的产甲烷路子，甲醇和乙酸产甲烷路子的活力中等。尽管16S rRNA基因序列分析清爽氢养分型的甲烷杆菌相对含量最高，但H2复原CO2产甲烷路子的活力很低，诠释这些古菌在湿地中并不活跃。

由于扎龙湿地长年处于低温，咱们进一步分析该湿地是否存在耐低温的产甲烷路子。通过比较18 ℃和30 ℃不同富集物的产甲烷速度，发现18 ℃的亦然三甲胺[2.89 mmol CH4/(L·d·g-soil)]和甜菜碱[1.64 mmol CH4/(L·d·g-soil)]产甲烷速度最高，但比30 ℃相似富集物的产甲烷速度[三甲胺：3.14 mmol CH4/(L·d·g-soil)；甜菜碱：3.44 mmol CH4/(L·d·g-soil)]低，其中甜菜碱的产甲烷速度约为30 ℃相似富集物的1/2。何况比较2个温度下富集物开动产甲烷时候发现，18 ℃的富集物在培养10 d后才开动产甲烷(图 2B)，而30 ℃的培养物在4 d时即开动产甲烷(图 2B)，但18 ℃的富集物在26 d时的产甲烷量与30 ℃的终点。这诠释湿地土中可能存在耐低温的甲基产甲烷菌。

2.3 富集到扎龙湿地的上风甲基产甲烷古菌和复原甜菜碱的细菌

为分析甲基型产甲烷古菌及复原甜菜碱的细菌菌群，咱们提真金不怕火30 ℃厌氧培养26 d的三甲胺、甜菜碱和甲醇富集物的DNA，测定其16S rRNA基因扩增子的序列。效用浮滑了388个古菌的OTU和383个细菌的OTU。三甲胺、甜菜碱和甲醇富集物中已知分类地位的古菌科辞别占测定总古菌的98.22%、92.30%和91.55%；已知分类地位的细菌门辞别占测定总细菌的44.51%、45.2%和86.19%。图 3和图 4辞别为产甲烷古菌科和属、细菌科和属的构成过火相对品貌。与原位泥土比较，三甲胺富集物中甲基型的甲烷八叠球菌科(Methanosarcinaceae)和H2复原甲基型的甲烷马赛球菌科(Mehanomassiliicoccaceae)显耀富集，辞别莳植6.7倍和2.7倍，甜菜碱富集物等辞别莳植4.4倍和2.4倍，甲醇富集物等辞别莳植4.8倍和1.8倍(图 3A)；甲烷八叠球菌属在三甲胺、甜菜碱和甲醇富集物等辞别莳植了13.7、11.9和12.8倍(图 3B)。上述效用诠释扎龙湿地芦苇根际土中主要的甲基产甲烷古菌包含甲烷八叠球菌属和甲烷马赛球菌科。

16S rRNA基因各类性及相对品貌分析发现，湿地泥土的甜菜碱富集物中的细菌以厚壁菌门(Fimicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota)为主，辞别占63.93%和27.89%；厚壁菌门中的鼠胞菌科(Sporomusaceae)、千里积杆菌科(Sedimentibacteraceae)和亨盖特梭菌科(Hungateiclostridiaceae)比原位湿地辞别莳植了173、308和187倍(图 4)；而梭菌科(Clostridiaceae)和真杆菌科(Eubacteriaceae)品貌辞别比原位土莳植了1.4倍和1.5倍，流露它们可能是代谢甜菜碱的主要细菌，复原甜菜碱产生三甲胺，提供产甲烷的底物。对富集物的宏基因组分析也发现，细菌代谢甜菜碱的接头功能基因grdH和产甲烷菌代谢三甲胺的功能基因mttB品貌均莳植(未展示效用)。

2.4 定量分析甲基物资富集的上风产甲烷古菌

16S rRNA基因序列分析标明，扎龙湿地甲基物资富集物中的上风产甲烷古菌为甲烷八叠球菌和甲烷马赛球菌，为了细目这两类古菌被富集，咱们采取RT-qPCR才智，定量分析了甲烷八叠球菌特异的16S rRNA基因和甲烷马赛球菌特异的甲基搬动酶基因mtaB。效用发现，产甲烷八叠球菌科在三甲胺富集物(1.02×108 copies/g)中比在原位泥土(9.02×106 copies/g)莳植了10.27倍，在甜菜碱富集物(6.90×107 copies/g)中莳植了6.8倍，在甲醇富集物(5.24×107 copies/g)中莳植了6.64倍(图 5A)。相似，甲烷马赛球菌科在甜菜碱富集物中(1.64×107 copies/g)比原位泥土(1×106 copies/g)莳植了13.39倍，在甲醇(1.65×107 copies/g)和三甲胺富集物(3.72×106 copies/g)等辞别莳植了13.34倍和2.25倍(图 5B)。进一步解释湿地泥土中从三甲胺产甲烷的上风菌为甲烷八叠球菌，甲烷马赛球菌也推崇热切作用。

3 征询与论断

Liu等[9]推敲发现芦苇收割是影响扎龙低温高碱湿地甲烷排放的主要身分，不收割芦苇的湿地甲烷排放量高达(7.89±1.35) mg/(m2·h)。咱们通过16S rRNA基因扩增子测序发现，扎龙湿地芦苇根际土的上风产甲烷古菌是甲烷杆菌、噬甲烷菌、甲烷鬃菌、甲烷八叠球菌和甲烷马赛球菌，上风细菌为绿弯菌门、变形菌门、酸杆菌门和拟杆菌门。通过富集履行发现甜菜碱着手的三甲胺产甲烷路子是扎龙湿地芦苇根际土的上风产甲烷路子，其中代谢甜菜碱的上风细菌为厚壁菌门的鼠胞菌科、千里积杆菌科和亨盖特梭菌科。RT-qPCR定量分析标明，代谢三甲胺的上风产甲烷古菌是甲基养分型的甲烷八叠球菌和H2复原甲基物资的甲烷马赛球菌。

与海洋及滨海盐沼湿地相似，扎龙湿地高盐环境中的甲基物资是三甲胺，其主要来自于细菌改造抗高渗物资甜菜碱或胆碱产生，被产甲烷古菌进一步代谢产甲烷[26]。甜菜碱是一种相似相容物资，能踏实细胞结构，保抓酶、卵白质复合物的活性和细胞膜的好意思满性，因此匡助细胞扞拒环境中的盐碱、上下温威胁[31]。生涯在高盐环境的一些生物细胞中的甜菜碱浓度可高达1 mol/L[32]。Jameson等[33]通过对滨海盐沼千里积物16S rRNA基因各类性分析和碳同位素示踪技巧及宏基因组学分析发现，暗杆菌(Pelobacter)和甲烷拟球菌(Methanococcoides)协同代谢胆碱产甲烷。另外，未得回纯培养的甜菜碱菌科Ca. “Betainaceae”可代谢甜菜碱产生三甲胺[34]。

与其他盐碱生境不同，扎龙低温湿地的上风甲基产甲烷古菌主要为甲烷八叠球菌和甲烷马赛球菌，而海洋中主要的甲基产甲烷古菌为甲烷拟球菌[31]。扎龙低温湿地中代谢甜菜碱产生三甲胺的上风细菌为厚壁菌门的鼠胞菌科和梭菌科，这与海洋生境中代谢甜菜碱的上风细菌为梭菌科较为相似，流露梭菌科中代谢甜菜碱产生三甲胺的细菌具有生态分散的庸碌性。扎龙湿地最热的7月平均温度为22.9 ℃[35]，咱们通过不同温度富集履行发现，扎龙湿地代谢三甲胺产甲烷古菌为耐低温产甲烷古菌，扎龙湿地代谢甜菜碱产甲烷主要发生在芦苇孕育季，在凉爽的非孕育季代谢甜菜碱产三甲胺的细菌活力裁减，导致甲烷排放减少。黄璞祎等[36]推敲了扎龙湿地孕育季甲烷通量，不雅测期内平均甲烷通量为7.67 mg/(m2·h)，意料扎龙芦苇湿地每年孕育季向大气开释3.88×105 t甲烷。而Liu等[9]推敲发咫尺芦苇孕育期8–9月，平均甲烷排放量为(10.72±5.10) mg/(m2·h)，干预冻结期裁减至(3.94±2.25) mg/(m2·h)；在湿地名义覆水溶化的经过中，扎龙湿地泥土平均原位甲烷排放通量继续裁减至(1.96±2.50) mg/(m2·h)。

甲烷厌氧氧化(anaerobic oxidation of methane， AOM)是缺氧环境中甲烷养分古菌的生物学经过[33]，不同的生态系统中，甲烷养分古菌哄骗不同的电子受体氧化甲烷[37-39]；Timmers等[40]发现海洋中厌氧甲烷氧化古菌(anaerobic methan-otrophic archaea， ANMEs)和硫酸盐复原菌(sulfate-reducing bacteria， SRB)协同降解甲烷，其后发现也能以硝酸盐为电子受体厌氧氧化甲烷[41]。Haroon等[42]报谈了淡水环境中的Ca. Methanoperedens nitroreducens和Methylomirabilis oxyfera介导的耦联硝酸盐复原的甲烷厌氧氧化。Chen等[37]发现青藏高原若尔盖湿地中含有Ca. Methanoperedens。本推敲也发现扎龙低温盐碱湿地存在丰富的Ca. Methanoperedens，可能是芦苇根际土产生的无数甲烷为其提供饱胀的底物。铁是地壳等分散含量第二高的金属，以三价铁为电子受体的甲烷厌氧氧化庸碌存在。前期推敲测得扎龙湿地泥土中硝酸盐含量0.09−0.25 mg/kg，总铁元素含量约为6.494−28.256 mg/kg[43]，因此扎龙湿地也可能存在偶联三价铁复原的甲烷厌氧氧化经过，但不摒除偶联硝酸盐复原的厌氧甲烷氧化经过。

总而言之，本推敲解释扎龙盐碱湿地芦苇根际土中的三甲胺产甲烷是上风路子，三甲胺来自细菌改造生物抗高渗的甜菜碱，上风的产甲烷古菌是甲烷八叠球菌和甲烷马赛球菌。